Brak zakażenia HIV u dawców krwi z nieokreślonymi testami Western Blot na przeciwciała przeciwko HIV-1 cd

Jedenaście dawców krwi pełnej, którzy byli ujemni pod względem przeciwciał w teście immunoenzymatycznym, wybrano losowo i przeprowadzono wywiady w czasie dawstwa; próbki krwi od tych dawców zostały użyte do zapewnienia kontroli negatywnych pod względem HIV-1. Wszystkie próbki krwi zostały zakodowane i przetestowane na ślepo. Dane analizowano standardowymi jednowymiarowymi metodami, w tym testem chi-kwadrat i dokładnym testem Fishera, dwustronnością i analizą wariancji dla porównań wieku.
Testy labolatoryjne
Przeprowadzono dwa testy immunoenzymatyczne na obecność przeciwciał HIV-1 (Genetic Systems i Abbott Laboratories) na oryginalnych i kontrolnych próbkach surowicy, dla których wyniki Western blot były nieokreślone, zgodnie z zaleceniami producenta. Różne nielicencjonowane testy Western blot dla HIV-1 zostały wykonane na oryginalnych próbkach surowicy w momencie dawstwa; licencjonowane Western blot HIV-1 (Dupont Diagnostics, Wilmington, Del.) przeprowadzono na wszystkich kontrolnych próbkach surowicy. Wszystkie bloty Western zostały odczytane przez trzech niezależnych obserwatorów, a ostateczne interpretacje zostały oparte na porozumieniu co najmniej dwóch z trzech czytelników.
Przeprowadzono również następujące testy na wszystkich kontrolnych próbkach surowicy: test immunoenzymatyczny p24 HIV-1 i gp41 (czułość, 100,0%, specyficzność, 99,95%), 12, 13, który wykorzystuje rekombinowane antygeny p24 i gp41 (Envacor, Abbott Laboratories ), Immunoenzymatyczny test immunoenzymatyczny HIV-1 / HIV-2 (czułość, 100,0 procent i 99,5 procent dla odpowiednio znanych próbek HIV-1 i HIV-2, specyficzność, 99,8 procent) 14 (Abbott), HTLV-I / II test immunoenzymatyczny (Abbott), 15 test radioimmunoprecypitacyjny HIV-1, 16 i test immunologiczny antygen p24 wirusa HIV-1 (Abbott) .17
Ponadto, próbki surowicy od wszystkich dawców hodowano dla HIV-1 za pomocą metody opisanej szczegółowo gdzie indziej.18 W skrócie, x 107 komórek jednojądrzastych krwi obwodowej dawcy było ko-hodowanych przez 35 dni z jednojądrzastymi komórkami HIV-1 z jednojądrzastymi komórkami krwi obwodowej stymulowane fitohemaglutyniną w pożywce RPMI-1640 zawierającej 20 procent płodowej surowicy cielęcej i 5 procent interleukiny-2. W celu oceny obecności HIV-1 supernatanty z hodowli testowano pod względem antygenu p24 metodą immunoenzymatyczną (Abbott) dwa razy w tygodniu. Uważano, że hodowle mają produktywny HIV-1, jeśli antygen HIV-1 został wykryty w dwóch szeregowych supernatantach, przy czym drugie pobranie wykazało co najmniej dwukrotny wzrost reaktywności. Czułość tej techniki hodowli wynosi 99 procent w wykrywaniu HIV-1 w jednojądrzastych komórkach krwi obwodowej osób bezobjawowych z pozytywnymi wynikami testu na Western blot.
Supernatanty hodowlane badano również w 21 dniu pod kątem aktywności odwrotnej transkryptazy za pomocą testu opisanego gdzie indziej.19 Obecność HIV-1 lub innego retrowirusa w hodowli była podejrzewana, jeśli (1) zależna od cząstek aktywność odwrotnej transkryptazy mierzona za pomocą poli […] rA]: oligo [dT] 12-18 szablon nukleotydowy był większy niż 10 000 cpm na 1,5 ml supernatantu; i (2) aktywność ta była co najmniej trzy razy większa niż aktywność zmierzona za pomocą szablonu poli [dA]: oligo [dT] 12-18.
Amplifikację i detekcję sekwencji HIV przez reakcję łańcuchową polimerazy przeprowadzono w sposób zaślepiony na próbkach DNA od 99 dawców z nieokreślonymi wynikami na analizie Western, 11 przeciwciało-negatywne dawców i 14 z 16 donorów pozytywnych względem przeciwciał
[więcej w: badania ginekologiczne rodzaje, sole amonowe, mięsak kaposiego ]